El virus del Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRSV) es y ha sido el agente causal de enormes pérdidas económicas para la industria porcina alrededor del mundo. El virus emergió en los Estados Unidos a finales de la década de los 80 y, simultáneamente, se reportaron presentaciones clínicas similares en Alemania y otros países de Europa.
Sorprendentemente, se observó que, a pesar de la variabilidad genética observada entre las cepas descritas en Europa y en Estados Unidos, estos dos virus tenían manifestaciones clínicas similares.
Estos primeros estudios demostraron que las cepas europea y americana solo compartían un 50 -70% de homología en su estructura genética. Así, se definieron dos genogrupos distintos:
PRRSV – BACK TO BASICS
El PRRSV es un virus ARN perteneciente a la familia Arterivirus (orden Nidovirales) que presenta:
Manifestaciones clínicas del PRRS
Las manifestaciones clínicas del PRRS pueden variar desde formas leves asintomáticas, a enfermedad severa asociada a altos porcentajes de mortalidad debido a infecciones secundarias, susceptibilidad del hospedador, inmunidad del grupo y virulencia de la cepa implicada.
Los animales adultos afectados presentan anorexia y fiebre seguido de FALLOS REPRODUCTIVOS:
En cuadros asociados a fallos reproductivos, los abortos son el resultado de infección sistémica en la cerda, observándose[registrados] principalmente durante el primer tercio de la gestación.
La infección en las cerdas induce liberación masiva de interferón gamma y otras interleucinas proinflamatorias, resultando en fallo reproductivo. |
Durante el segundo y último tercio de la gestación, los fallos reproductivos se deben a daño específico de macrófagos placentarios sobre la barrera materno-fetal. |
Los lechones recién destetados pueden sufrir CUADROS RESPIRATORIOS severos que se pueden ver agravados por coinfecciones con otros virus (Influenza, Circovirus) o por infecciones bacterianas secundarias, lo que se traduce en:
Patogenia y cuadro lesional asociado al PRRSV
La patogenia del PRRSV está asociada a la multiplicación del virus en macrófagos alveolares, intravasculares, células dendríticas y monocitos activados.
Como consecuencia de la necrosis severa de macrófagos, se reducen significativamente los mecanismos de defensa pulmonar, predisponiendo al hospedador a infecciones bacterianas secundarias.
Desde el punto de vista anatomopatológico, es habitual observar neumonía intersticial leve a neumonía intersticial complicada con áreas de bronconeumonía sobreagregadas debido a infecciones bacterianas secundarias.
A nivel de linfonodos, se puede observar:
Las alteraciones a nivel pulmonar se manifiestan clínicamente como afectación respiratoria severa, disnea y cianosis.
APROXIMACIÓN DIAGNÓSTICA AL PRRS
El diagnóstico del PRRSV puede tener distintos objetivos que tendrán un impacto directo en decisiones de manejo en la granja, siendo importante definir los objetivos de los programas diagnósticos, por ejemplo:
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Detección del PRRSV mediante PCR
Para el diagnóstico directo, el método más utilizado en la actualidad es la detección del ARN viral mediante PCR.
Los laboratorios utilizan distintas regiones del virus como targets para sus diagnósticos, incluyendo cebadores específicos para la proteína estructural de matriz (ORF6), para la nucleoproteína (ORF7) y para alguna de las proteínas no estructurales (nsp2).
Debido a la gran variabilidad genética observada en la región ORF5, las PCR dirigidas contra proteínas estructurales son las preferidas para la secuenciación, lo que permite evaluar esta variabilidad genética dentro de la granja o a nivel regional.
Las muestras requeridas para el diagnóstico directo por PCR pueden incluir:
Cabe recordar que el virus también puede ocasionar un incremento significativo en el número de lechones momificados, lo que debe tenerse en cuenta al realizar el diagnóstico diferencial con otros virus asociados a procesos reproductivos, como Parvovirus.
Estas últimas muestras permiten evaluar la presencia del virus en granjas de madres y determinar si los lechones se infectan a edad temprana.
Uno de los métodos más utilizados para reducir costes es el agrupamiento de muestras, ya sea de sueros, fluidos orales, semen y/o tejidos.
La técnica de PCR es rápida y tiene gran sensibilidad y especificidad. Sin embargo, debido a su alta sensibilidad, la contaminación ambiental en granjas endémicas donde el virus está presente en el ambiente es relativamente fácil.
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Determinación de la variabilidad genética del PRRSV
CARACTERIZACIÓN MEDIANTE RFLP
Más allá de la detección viral, también se debe tener información precisa de la caracterización genética del virus para garantizar el movimiento seguro de los animales entre establecimientos, evitando así la diseminación de nuevas variantes a establecimientos negativos o previamente infectados con cepas heterólogas.
La técnica de digestión con enzimas de restricción (RFLP) de la región ORF5 utiliza 3 enzimas de restricción (Mlul, HincII, y SacII) que cortan la secuencia nucleotídica en regiones específicas, dando así patrones específicos codificados numéricamente para cada enzima.
Es sabido que el cambio en un solo nucleótido puede cambiar el patrón RFLP, sin observarse cambios en la patogenicidad, tasa de replicación o significancia clínica.
SECUENCIACIÓN Y ANÁLISIS FILOGENÉTICO
Hoy en día, la variabilidad genética se evalúa a través de la secuenciación y análisis filogenético debido a que estas técnicas son mucho más fiables y generan información exacta sobre la composición genética de las cepas evaluadas.
La secuenciación se realiza generalmente en el segmento ORF5, pero también se puede incluir el segmento ORF6:
Aislamiento del PRRSV
Otro método utilizado para el diagnóstico del PRRS es el aislamiento viral, técnica basada en la capacidad del virus de generar un efecto citopático en un gran número de líneas celulares (MARC-145, BHK21 y CL-262).
Dependiendo de la cepa viral y su virulencia, el efecto citopático puede no ser tan marcado.
Tal vez una de las desventajas de este método es el tiempo necesario para la confirmación (5-8 días). Además, la interpretación de los resultados debe ser cuidadosa, ya que resultados de aislamiento viral negativo pueden significar que los animales no han sido infectados o que las partículas presentes no son infectivas debido a:
Detección del PRRSV en tejidos
La detección in situ es muy relevante, ya que permite asociar la presencia del PRRSV al cuadro lesional. Así, la evaluación de tejidos fijados para histopatología se puede complementar con:
Para ambas técnicas se utilizan tejidos fijados en formol al 10% incluyendo:
La IHQ tiene gran especificidad y moderada sensibilidad, permitiendo detectar con al menos un 90% de certeza animales infectados con el PRRSV.
Para el diagnóstico de tejidos debemos tener en cuenta el momento de infección: A la hora de interpretar los resultados, es importante tener en cuenta qué resultados negativos se deben a la ausencia del virus y cuáles se pueden atribuir a errores de muestreo, fallos de la técnica o del operador observando la tinción en tejidos, así como a la variabilidad genética de la cepa evaluada, ya que podría no ser detectada por los anticuerpos de rutina. |
CONTROL DEL PRRSV
Una de las características más importantes y que dificulta el control y erradicación del PRRSV es su rápida capacidad de mutación y evolución. Hoy en día, el manejo de la enfermedad está basado en:
1. La vacunación
2. La implementación de medidas de bioseguridad para prevenir la diseminación o introducción del virus a la granja
Numerosas vacunas comerciales se encuentran disponibles incluyendo:
Los programas de aclimatación de reproductoras basados en la exposición intencional a la cepa circulante en la granja es una de las rutinas que se puede utilizar para inducir inmunidad de grupo en el hato reproductor.
El diagnóstico y monitorización del PRRSV es complicado debido a la naturaleza del virus, la dinámica y flujo de los animales, los avances en las distintas técnicas diagnósticas y las técnicas para prevenir la manifestación clínica de la enfermedad.
Las nuevas técnicas moleculares permiten hacer estudios epidemiológicos más fiables, mientras que la detección de antígenos permite realizar un mejor diagnóstico de los casos clínicos. Por otro lado, las pruebas serológicas ayudan a determinar la exposición previa.
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