La Figura 1 recoge las muestras más adecuadas para el diagnóstico según la fase de la enfermedad y la evolución de la respuesta inmune, pudiendo emplearse métodos de diagnóstico:
- Directos: cultivo y pruebas de PCR
- Indirectos: prueba de microaglutinación y ELISA
Relación entre la respuesta inmune, sintomatología y muestras a enviar para diagnóstico
Figura 1. Evolución de la sintomatología y título de anticuerpos durante la leptospirosis.
Métodos directos
El único método que nos permite determinar la serovariedad de Leptospira es el cultivo y aislamiento, pero es difícil, caro y tedioso.
Condiciones de envío de la muestra
- En la muestra no haya residuos antibióticos.
- La autolisis tisular no esté avanzada.
- Las muestras se hayan mantenido en refrigeración.
- Que no transcurran más de 24 horas entre su obtención y el cultivo.
Entre los métodos de diagnóstico directo de la leptospirosis más utilizados están las técnicas de PCR debido a las ventajas que ofrecen:
- Gran sensibilidad
- No requieren bacterias viables
- Rapidez
Las pruebas más utilizadas son las dirigidas a genes presentes únicamente en las leptospiras patógenas, por lo que un resultado positivo solo indica, en este caso, la presencia de una cepa patógena pero no permite la identificación directa de la serovariedad.
Interpretación de resultados de los métodos de diagnóstico directo
MÉTODOS INDIRECTOS
PRUEBA DE MICROAGLUTINACIÓN (MAT)
La prueba más utilizada para el diagnóstico de leptospirosis es la prueba de microaglutinación (microscopic agglutination test o MAT).
Se considera significativo un título de 1/100 o mayor.
ESPECIFICIDAD DE LA PRUEBA DE MICROAGLUTINACIÓN
La prueba de microaglutinación es serogrupo específica y relativamente serovariedad específica. Es importante elegir las serovariedades representativas de cada serogrupo que se incluyen en la prueba
En nuestro país deberían incluirse como mínimo cepas de las serovariedades Bratislava, Canicola, Icterohaemorrhagiae, Pomona y Castellonis.
Como prueba individual, tiene valor diagnóstico en los casos agudos.
El diagnóstico se hará viendo si hay seroconversión, tomando un suero en la fase aguda y otro 2-3 semanas más tarde
En casos de abortos y nacidos muertos o poco viables tiene valor diagnóstico si se detectan anticuerpos en suero fetal o en suero de lechones que no han tomado calostro.
En estos casos, se enviará al laboratorio suero de al menos un 10% de las cerdas, distribuidos proporcionalmente por ciclos y enviando siempre un mínimo de 10 sueros, para determinar si ha habido infección por estas serovariedades en la granja.
Por último, el MAT no es fiable para la detección de portadores renales (serovariedades Pomona Tarassovi, Bratislava y Muenchen) y/o genitales (serovariedades Bratislava y Muenchen).
Así, se han descrito casos de infecciones por la serovariedad Pomona en los que la leptospiruria dura años, por lo que en estos animales no detectaremos títulos significativos de anticuerpos, pero estarán eliminando leptospiras en la orina.
En general, la cepa frente a la que se obtengan los títulos más altos en la MAT se corresponderá con el serogrupo infectante. Sin embargo hay que considerar varios aspectos:
- La serovariedad implicada no tiene porqué ser la misma que la utilizada en la prueba.
Ej.: la serovariedad que se aconseja como representativa del serogrupo Pomona es la serovariedad Pomona. Si en el MAT se obtienen los títulos más altos frente a esta cepa, no diferencia si la serovariedad implicada es la serovariedad adaptada Pomona o la serovariedad accidental Mozdok, que son las dos que sabemos que circulan en nuestro país de este serogrupo.
- Hay reacciones cruzadas entre serogrupos y en algunas infecciones puede que se obtengan títulos muy similares frente a más de una de las cepas utilizadas en el MAT.
Ej.: en caso de infecciones por el serogrupo Pomona, hemos observado títulos en un mismo suero de 1/10.000 tanto frente a la serovariedad Pomona como a la serovariedad Bratislava o diferencias en el título frente a ambas serovariedades de solo una dilución.
Finalmente, las pruebas ELISA son muy útiles por su sencillez en comparación con el MAT.
El problema de las pruebas ELISA es que normalmente se han validado frente al MAT tomando como punto de corte el título de 1/100, por lo que no son de gran utilidad para detección de portadores, y al igual que el MAT, no diferencian animales infectados de vacunados.
