Evaluación del estrés a través de la saliva porcina

El uso de la saliva como muestra biológica tiene muchas ventajas, principalmente relacionadas con su obtención, ya que es un procedimiento no invasivo, simple y que no genera dolor.

Además, se pueden obtener muestras repetidas en cualquier momento y lugar, sin necesidad de personal especializado. Por lo tanto, es muy adecuada para fines de monitorización y tiene muchas aplicaciones potenciales, tanto en medicina veterinaria como humana.

Estas ventajas son especialmente relevantes en cerdos, donde la extracción de sangre es muy estresante, tanto para el animal como para el personal encargado de la toma de muestras.

El uso de saliva en la especie porcina puede ser muy apropiado, pudiendo el personal tomar muestras fácilmente, lo que permite realizar análisis más frecuentes y controlar mejor la salud y el bienestar animal (Imagen 1).

En una revisión sobre la utilización de la saliva para la detección de patógenos en cerdos se señaló la posibilidad de detectar más de 23 patógenos virales, siendo la detección de enfermedades infecciosas el principal uso de la saliva en la práctica rutinaria en esta especie.

Sin embargo, la saliva también puede ser utilizada para evaluar otros aspectos relacionados con la salud y el bienestar animal, como:

Nivel de estrés
Respuesta inflamatoria
Respuesta inmunitaria
Equilibrio redox

En este artículo se repasan los principales biomarcadores empleados para evaluar el nivel de estrés en cerdos.

Además, se incluyen algunos consejos generales relativos a la toma de muestras y el almacenamiento de la saliva.

BIOMARCADORES DE ESTRÉS Cortisol Alfa-amilasa salival (sAA) Cromogranina-A (CgA) Esterasa total (TEA) y sus componentes Oxitocina (OT)

  Cortisol  

Actualmente, el cortisol sigue siendo el biomarcador más utilizado para detectar [registrados]el estrés en cerdos. Cuando se produce una situación de estrés, se activa el eje hipotalámico-pituitario-adrenal (HPA) que desencadena la liberación de cortisol a la circulación sanguínea (Figura 1).

En la sangre, el cortisol está presente en dos fracciones, unido a proteínas y libre. En cambio, en la saliva solo hay cortisol libre, que es la fracción activa.

El paso del cortisol libre desde la sangre hacia la saliva se produce por difusión pasiva de la molécula a la glándula salival.

Debe tenerse en cuenta que existe variabilidad en los rangos de referencia reportados en la literatura para este metabolito en animales no estresados y una alta variación intraindividual al estrés.

Es importante tener en cuenta que las concentraciones de cortisol en saliva siguen un ritmo circadiano que puede variar con la edad y el sexo.

La variabilidad entre animales puede alcanzar un coeficiente de variación del 62% en la saliva de animales no estresados.

Por lo tanto, es recomendable comparar las concentraciones de cortisol en un individuo con los valores obtenidos con el mismo ensayo e, idealmente, en el mismo animal o grupo de animales con condiciones similares de edad, raza y sexo y sin signos evidentes de estrés.

  Alfa-amilasa salival (sAA) y Cromogranina-A (CgA)  

La sAA y CgA son biomarcadores producidos directamente por la estimulación de las glándulas salivales por el sistema nervioso autónomo (SNA).

Ambos analitos pueden aumentar en situaciones de estrés agudo. Sin embargo, al igual que el cortisol, la variabilidad individual es amplia:

En un modelo de restricción por encierro en una jaula durante 60 minutos, el aumento de CgA fue 4 veces superior a los valores basales, permaneciendo aumentada (2-3 veces por encima del nivel basal) a los 30 minutos desde el cese del estímulo, lo que podría indicar una posible relación de este biomarcador con el estrés de duración más prolongada.

Si bien, ambos biomarcadores están relacionados con el SNA y, por tanto, con la reacción que se produce tras un estrés agudo, se han descrito cambios en los niveles de CgA y sAA en situaciones de estrés crónico, por ejemplo:

Se ha observado el aumento de los niveles de sAA en cerdos que sufrían dolor por cojera y prolapso rectal.

Los animales con estos trastornos mostraron aumentos aún mayores de sAA (7,49 veces y 18,20 veces en los casos más graves de cojera y prolapso, respectivamente, en comparación con los animales sanos) que de otros biomarcadores como el cortisol (1,72 veces y 2,30 veces en los animales cojos y con prolapso, respectivamente).

Asimismo, aunque no se conoce bien el mecanismo, se ha observado la disminución de los niveles de CgA en saliva tras el aporte de diferentes tipos de enriquecimiento ambiental y suplementación con hierbas durante 2 meses en cerdos en crecimiento, pasando de 1 mg/L a valores inferiores a 0,3 mg/L.

Esto podría indicar una reducción del estrés de estos cerdos durante este periodo. Además, la CgA en saliva mostró una correlación de baja a moderada, pero significativa, con la concentración de cortisol en pelo.

La CgA también es un biomarcador temprano del síndrome de disgalactia postparto (SDP), ya que aumenta significativamente en cerdas con SDP antes del parto, mostrando una mayor sensibilidad que otros marcadores como el cortisol.

Aunque se desconoce la razón de este aumento, los valores elevados de CgA podrían indicar una situación de estrés con activación del sistema adrenérgico que podría estar implicado en la patogénesis de esta enfermedad.

Además, podría existir un papel de la CgA en los trastornos gastrointestinales asociados al SDP, ya que, en el tracto gastrointestinal humano, la CgA es liberada por las células enterocromafines y las neuronas de los ganglios submucosos y mientéricos, pudiendo modular la motilidad colónica en respuesta a la inflamación.

  Actividad de la esterasa total (TEA) y sus componentes  

La TEA es abundante en la saliva de los cerdos. Varias enzimas contribuyen a esta actividad esterasa:

La colinesterasa (ChE) y la colesterol esterasa representan alrededor del 20% de la actividad TEA salival en cerdos sanos no estresados.

La lipasa salival (sLip) podría rondar el 30% en cerdos sanos no estresados.

La isoenzima 6 de la anhidrasa carbónica (CA-VI) podría representar hasta el 50% de la actividad de la TEA en la saliva porcina.

La TEA, la butirilcolinesterasa (BChE) y la sLip pueden medirse mediante técnicas espectrofotométricas, existiendo ensayos validados para cerdos.

La TEA salival puede aumentar en situaciones de estrés agudo, habiéndose descrito un aumento en 1,49 veces de su actividad en cerdos justo después del estímulo (la sujeción mediante lazo nasal).

Además, se registró un aumento (1,8 veces) de la TEA salival a las 4 h de la descarga y la estabulación en el matadero en comparación con los valores anteriores al transporte. Este aumento fue inferior al observado con otros biomarcadores como el cortisol.

El comportamiento de la TEA en saliva en estrés crónico debe ser evaluado más profundamente. En este sentido, podría verse aumentada en cerdos que sufren dolor debido a cojera y prolapso rectal.

  Oxitocina (OT)  

Esta hormona, además de tener un importante papel en la fisiología del parto y la lactación, se considera un biomarcador de emociones positivas y bienestar social en animales domésticos.

La fuente de OT en la saliva es desconocida, pero un informe reciente en humanos indica que la OT salival puede reflejar la concentración y producción endógena.

En la saliva de los cerdos, al igual que en otras especies, la OT puede estar en dos formas principales:

Unida a proteínas
Libre

Al igual que otros biomarcadores, el conocimiento sobre las mediciones de OT en la saliva de cerdos está en sus inicios.

La OT en la saliva puede disminuir en situaciones de estrés agudo.

En un estudio se encontraron disminuciones en las concentraciones salivales de OT en cerdos a las 4 h de estabulación en un matadero. Esto podría indicar una disminución de bienestar en esta situación, posiblemente debido a diversos estímulos estresantes como el proceso de:

Descarga
Mezcla con cerdos desconocidos
Ambiente extraño

La OT puede aumentar por interacciones positivas.

En un estudio en el que se evaluaron las interacciones positivas entre humanos y animales en cerdos, la concentración de OT en saliva se asoció positivamente con ser acariciado.

Además, la eyaculación aumenta las concentraciones salivales de OT en verracos reproductores.

Por lo tanto, estos datos sugieren que esta hormona puede ser un marcador de emociones positivas.

  Conclusiones  

La saliva de los cerdos puede utilizarse para medir biomarcadores que pueden ayudar a evaluar el estrés, la respuesta inflamatoria, el sistema inmunitario y la homeostasis redox.

Estos biomarcadores reflejan que la saliva, además de ser una herramienta de diagnóstico para la detección de enfermedades infecciosas, puede proporcionar información interesante sobre el estado de salud y bienestar de los cerdos.

Sin embargo, todavía se necesitan más datos para validar el uso de la saliva en este campo. Por lo tanto, se espera que en un futuro próximo se generen más conocimientos sobre la fisiología y aplicaciones prácticas de los marcadores salivales aquí revisados, y también sobre otros nuevos que puedan descubrirse, especialmente mediante técnicas «ómicas».

Se espera que el conocimiento generado proporcione información más precisa y útil sobre estos biomarcadores, contribuyendo a un uso más amplio de la saliva en esta especie, así como en otras especies animales y en humanos en el futuro.

Artículo traducido y adaptado de: Cerón, J.J. et al. (2022) “Basics for the potential use of saliva to evaluate stress, inflammation, immune system, and redox homeostasis in Pigs,” BMC Veterinary Research, 18(1) (CC BY 4.0).

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