Pleuroneumonía porcina, evolución de la sensibilidad antibiótica en los últimos 3 años

El tratamiento de los animales enfermos se lleva a cabo con los antibióticos seleccionados mediante pruebas de sensibilidad antibiótica in vitro tras el aislamiento bacteriano de App a partir de órganos o muestras respiratorias (Imagen 1).

Las pruebas más habituales son la técnica de Kirby-Bauer, comúnmente conocida como antibiograma en disco, y los métodos de determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), como el método por microdilución y el sistema de E-test (Imagen 2).

En general, se ha observado una alta sensibilidad por parte de App a la mayoría de antibióticos registrados para el tratamiento de las infecciones causadas por esta bacteria, a excepción de la gentamicina, penicilina y tetraciclina¹.

In vivo, la eficacia del tratamiento antibiótico puede verse afectada por diversos factores, entre los que cabe destacar la producción de biofilm (comunidades microbianas embebidas en una matriz polimérica que permiten adherirse a superficies bióticas, como los pulmones, y abióticas, como el agua de bebida).

En respuesta a factores estresantes, App es capaz de [registrados]formar biofilm, lo que puede interferir con los mecanismos inmunológicos porcinos y aumentar la resistencia a los antibióticos.

FRECUENCIA DE DETECCIÓN DE ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE EN MUESTRAS RESPIRATORIAS PORCINASLa frecuencia de detección de App en muestras respiratorias porcinas recibidas en Exopol S.L. entre 2018 y 2020 de diferentes explotaciones españolas fue del 14%, ya que se detectó en 1.082 de las 7.708 muestras. A partir de ellas,Se realizaron 513 antibiogramas y 57 CMI por microdilución y E-test.Esas mismas 57 cepas se utilizaron para el ensayo de biofilm in vitro.

ANTIBIOGRAMA
EN DISCO (MÉTODO
DE KIRBY-BAUER)

Se estudiaron las diferencias de sensibilidad de App en función del tiempo, la región y la edad a partir de 513 cepas. Así, mediante la técnica de Kirby-Bauer se clasificaron las cepas en sensibles, con sensibilidad intermedia o resistentes a los antibióticos testados.

Se apreció una disminución significativa de la sensibilidad respecto al tiempo (Gráfica 1) en el caso de la gentamicina, penicilina y tetraciclina (prueba de Chi-Cuadrado).

Respecto a la amoxicilina, enrofloxacina, florfenicol y gamitromicina también se detectaron diferencias significativas en función del tiempo. Sin embargo, no se encontró un patrón definido de aumento o disminución de la sensibilidad.

No se encontraron diferencias significativas en la sensibilidad a los antibióticos en función de la edad de los animales o de la localización geográfica de la explotación.

CONCENTRACIÓN MÍNIMA
INHIBITORIA (CMI)

En base a los datos del estudio de CMI por microdilución y E-test, se obtuvo la CMI₅₀ y CMI₉₀ (Tabla 1), que corresponden a la concentración mínima de antibiótico capaz de inhibir el crecimiento del 50% y 90% de la población bacteriana, respectivamente.

Se pudo inhibir el crecimiento del 90% de las cepas con una concentración de antibiótico inferior al punto de corte clínico en el caso de la amoxicilina, ceftiofur, gamitromicina, marbofloxacina, tildipirosina y tulatromicina, sugiriendo la alta eficacia de estos antibióticos para el tratamiento de la pleuroneumonía porcina.

En el caso de la gentamicina, penicilina y tetraciclina, más del 50% de las cepas analizadas tuvieron valores de CMI superiores al punto de corte clínico, confirmando los datos de alta resistencia de App frente a estos antibióticos obtenidos con la técnica de Kirby Bauer.

Para los antibióticos en los que aparece sensibilidad en la CMI₅₀ y resistencia en la CMI₉₀ (ampicilina, danofloxacina, enrofloxacina, florfenicol, tiamulina y trimetoprimsulfametoxazol) es interesante conocer la distribución de las cepas de App en función del valor de CMI (Gráfica 2).

Para la danofloxacina y enrofloxacina se vio una proporción muy alta de cepas sensibles con valores de CMI bajos, pero también cepas resistentes (21%) con valores de CMI más altos.

Se encontró una distribución normal para el florfenicol y la tiamulina, con un porcentaje de cepas resistentes del 16% y 21%, respectivamente.

El caso de la ampicilina resultó el más relevante, ya que se obtuvieron dos poblaciones de cepas muy sensibles y una población de cepas muy resistentes, siendo el porcentaje total de cepas resistentes del 35%.

ENSAYO DE PRODUCCIÓN IN VITRO DE BIOFILM

Para determinar la producción in vitro de biofilm por parte de App²:

Se cultivaron las cepas en placas de 96 pocillos.

Se tiñó el biofilm formado con cristal violeta y se solubilizó.

Se cuantificó en el espectrofotómetro.

La absorbancia es directamente proporcional al biofilm formado, es decir, cuanto mayor es la absorbancia, mayor es la producción de biofilm (Imagen 3).

Se observaron 3 grupos de cepas en función de la producción in vitro de biofilm (Gráfica 4): 50 de las 57 cepas produjeron una concentración baja de biofilm (absorbancia 0,00-0,10), 4 cepas una concentración intermedia (absorbancia 0,12-0,22), y 3 cepas una concentración alta (absorbancia 0,32-0,52).

PRODUCCIÓN DE BIOFILM VS RESISTENCIA ANTIBIÓTICA IN VITRO

A partir de la absorbancia medida y de la clasificación en cepas de App multirresistentes o no multirresistentes, se estudió la relación entre la producción de biofilm y la resistencia antibiótica in vitro.

No se encontró una asociación in vitro entre ambas variables (prueba U de Mann-Whitney, p-valor<0,05). Sin embargo, esto no significa que la producción de biofilm no interfiera en la eficacia del tratamiento antibiótico.

In vivo, la presencia de biofilm puede, entre otros mecanismos propuestos, impedir o ralentizar la difusión del antibiótico hasta la bacteria.

Sería interesante comparar la efectividad del tratamiento in vivo de las cepas que produjeron una concentración intermedia o alta de biofilm, ya que en caso de no ser efectivo dicho tratamiento se podría combinar con compuestos anti-biofilm³.

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