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El envejecimiento ovárico en las cerdas causa infertilidad y trastornos reproductivos. Factores como el estrés oxidativo, la ferroptosis y la autofagia parecen estar implicados en este proceso, pero los mecanismos subyacentes no se comprenden del todo. Este estudio se ha centrado en identificar los cambios moleculares y genéticos relacionados con el envejecimiento ovárico en cerdas, con el objetivo de aportar conocimiento para el desarrollo de estrategias que ayuden a mitigar sus efectos.
ENVEJECIMIENTO OVÁRICO Y ESTRÉS OXIDATIVO
El envejecimiento ovárico se caracteriza por la reducción del número de folículos y un deterioro de la calidad de los ovocitos, lo que conduce a una disminución gradual de la fertilidad de las hembras1,2.
ESTRÉS OXIDATIVO
En los mamíferos, las causas del envejecimiento ovárico se atribuyen principalmente al desequilibrio de los sistemas antioxidantes3. El estrés oxidativo es el principal impulsor del envejecimiento ovárico:
Disminuyendo la calidad de los ovocitos y provocando disfunción mitocondrial y apoptosis celular4.
Desencadenando patologías reproductivas como atresia folicular anormal, menor tasa de fertilización y enfermedades reproductivas5.
La acumulación excesiva de especies reactivas del oxígeno (ROS) inducida por el estrés oxidativo provoca la apoptosis de las células de la granulosa (CG)6, potencia la degeneración del cuerpo lúteo y conduce a la atresia folicular en las cerdas7.
FERROPTOSIS
La ferroptosis es una forma de muerte celular no apoptótica dependiente del hierro (Fe) y de las ROS8 caracterizada por la acumulación de especies reactivas de oxígeno lipídicas y hierro, formando así hidroperóxidos lipídicos9,10.
AUTOFAGIA
La autofagia, uno de los principales tipos de muerte celular programada11 y muerte celular de tipo II, consiste en la digestión las proteínas mal plegadas en los lisosomas, limpiando los orgánulos dañados, como las mitocondrias y los peroxisomas12.
De esta forma, mantiene la homeostasis celular y tisular13, protegiendo frente al envejecimiento, disminuyendo la actividad autofágica con el envejecimiento natural14.
No obstante, la autofagia excesiva o disfuncional es responsable de la muerte inducida por estrés oxidativo de las CG porcinas15,16.
Las observaciones realizadas en diversos estudios17-22 con otros diversos tipos celulares sugieren que el estrés oxidativo podría inducir la ferroptosis y la autofagia para regular el envejecimiento ovárico, pero los mecanismos implicados aún no se han dilucidado.
FOSFOLÍPIDO FOSFATASA 3
La fosfolípido fosfatasa 3 (PLPP3) pertenece a la familia de las fosfatasas del ácido fosfatídico y desfosforila los fosfolípidos en productos de señalización lipídica que suelen ser oxidadas por las ROS dando lugar a hidroperóxidos lipídicos23.
Estudios previos han revelado que los hidroperóxidos lipídicos inducen apoptosis celular, ferroptosis y autofagia17,24.
Por tanto, la PLPP3 podría estar implicada en el envejecimiento ovárico a través de la regulación del estrés oxidativo, la ferroptosis y la autofagia.
PAPEL DE PLPP3 EN EL ENVEJECIMIENTO OVÁRICO
En este estudio, se trató de explorar las funciones biológicas de PLPP3 en el estrés oxidativo, la ferroptosis y la autofagia en las CG e investigar el papel de PLPP3 en el desarrollo folicular.
Dado que el inicio de la pubertad indica la maduración de los folículos porcinos, se identificaron además las asociaciones entre la edad al inicio de la pubertad y los posibles marcadores moleculares de PLPP3. Estos resultados podrían proporcionar nuevas dianas para las investigaciones sobre el envejecimiento ovárico en mamíferos.
MATERIALES Y MÉTODOS
OBTENCIÓN Y ANÁLISIS DE LAS CG
Para este estudio se utilizaron ovarios envejecidos obtenidos de cerdas sacrificadas (más de 6 partos) y ovarios jóvenes obtenidos de cerdas de 5 meses.
Las células de la granulosa (CG) primarias porcinas se cultivaron para explorar el impacto de la PLPP3 en sus funciones celulares.
También, se les extrajo ARN y proteínas para realizar análisis qRT-PCR y Western Blot, así como el análisis del fenotipo celular y análisis funcional.
DETECCIÓN DE LA PUBERTAD Y ANÁLISIS GENÉTICO
El inicio de la pubertad de las cerdas se identificó mediante la observación del reflejo de inmovilidad y por contacto con los verracos, registrándose los signos de pubertad dos veces al día. Se extrajo ADN de 142 cerdas para calcular la frecuencia de genotipos y la frecuencia alélica de los SNPs en el promotor de PLPP3. |
Seguidamente, se realizó el análisis de asociación genética entre los SNPs PLPP3 y de la edad de presentación de la pubertad de las cerdas. |
DETECCIÓN ROS, AUTOFAGIA, SA β-GAL, MDA Y FE
Con el fin de caracterizar el estrés oxidativo y envejecimiento celular de las CG se realizaron los siguientes análisis:
RESULTADOS
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS OVARIOS
El tamaño