La Peste Porcina Africana (PPA) es una enfermedad vírica de los suidos domésticos y silvestres que actualmente amenaza a la industria porcina mundial1,2. Considerada una Enfermedad de Declaración Obligatoria (EDO) a la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE), ha avanzado notablemente en África, Europa y Asia en los últimos años3.
EL PAPEL DEL JABALÍ EN LA PROPAGACIÓN DE LA PESTE PORCINA AFRICANA
En la Unión Europea, el virus de la Peste Porcina Africana (VPPA) afecta principalmente a los jabalíes, que son responsables de más del 90% de los focos en diferentes países como Polonia, Hungría y Alemania3. El considerable aumento del tamaño y la amplia distribución geográfica de las poblaciones de jabalíes hace que sean muy relevantes para el mantenimiento de la enfermedad6,7 y un factor de riesgo importante para la infección en cerdos domésticos.
A pesar del papel central del jabalí en la epidemiología actual del VPPA, no hay estudios detallados sobre la patogenia y la evolución de la PPA en esta especie con las cepas del VPPA que circulan actualmente en Eurasia, a pesar de que se conocen muy bien las características de la infección en cerdos domésticos5,6.
Es necesario tener un conocimiento exhaustivo de la enfermedad en los jabalíes para garantizar un diagnóstico diferencial preciso y para poder distinguirla de otras enfermedades hemorrágicas que también pueden afectar a estos animales, como la Peste Porcina Clásica (PPC), el Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRS), la Erisipela Porcina, la Salmonelosis Septicémica o el Síndrome de Dermatitis y Nefropatía Porcina (SDNP)4.
Por esta razón, un diagnóstico preliminar de la PPA basado en las principales lesiones macroscópicas es clave para la detección precoz de la enfermedad en nuevas zonas y puede contribuir ampliamente a los esfuerzos de vigilancia y control de la enfermedad6.
CARACTERIZACIÓN DE LAS LESIONES MACROSCÓPICAS EN JABALÍES INFECTADOS CON UNA CEPA ALTAMENTE VIRULENTA DEL GENOTIPO II DEL VPPA
Para comprender mejor la patogenia y la evolución clínica de la PPA en los jabalíes, se infectó experimentalmente a jabalíes con la cepa Armenia 2007 (Arm07) del virus de la PPA, caracterizada por ser muy virulenta en cerdos domésticos y jabalíes8,9.
MATERIALES Y MÉTODOS
DISEÑO EXPERIMENTAL
En este estudio experimental se utilizó [registrados]la cepa Arm07 del genotipo II del virus de la Peste Porcina Africana, caracterizada por ser altamente virulenta y hemadsorbente. Se utilizaron 17 hembras de jabalí de 3-4 meses de edad y 10-15 kg de peso procedentes de una granja comercial de jabalíes:
No habían sido vacunadas frente a ninguna enfermedad infecciosa.
Eran negativas a la prueba ELISA para las enfermedades infecciosas de la vigilancia sanitaria española en jabalíes (RD 1082/2009) y también para otras enfermedades con importante prevalencia en España: Virus de Aujeszky, Mycobacterium bovis, virus de la Peste Porcina Clásica (VPPC), virus de la Peste Porcina Africana (VPPA), virus de la Enfermedad Vesicular Porcina, Mycoplasma hyopneumoniae, virus del Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRS) y Circovirus Porcino tipo 2 (PCV2).
El estudio se diseñó para comparar dos vías de infección diferentes. Para ello, los 17 jabalíes se dividieron en dos grupos:
Grupo inoculado intramuscular:seis jabalíes fueron inoculados por vía intramuscular (IM) con 1 mL de inóculo a una dosis de 10 HAD50 de la cepa Arm07 del VPPA.
Grupo en contacto:los 11 jabalíes restantes permanecieron alojados en contacto directo con los animales inoculados por vía IM durante todo el estudio.
EVALUACIÓN CLÍNICA
Con el fin de describir con la mayor precisión posible la evolución de la enfermedad, se realizó una evaluación clínica diaria de los animales. Para ello, se utilizó una cámara de vídeo las 24 horas del día para vigilar a los jabalíes y garantizar su bienestar animal, y los veterinarios especialistas realizaron visitas diarias para registrar los signos clínicos.
La evolución de la infección por el VPPA se evaluó en términos de una puntuación clínica cuantitativa (CS) siguiendo los parámetros clínicos específicos de la PPA en jabalíes10,11. Esta evaluación clínica incluye:
Comportamiento
Condición corporal
Alteraciones cutáneas
Secreción ocular/nasal
Inflamación articular
Síntomas respiratorios
Síntomas digestivos
Síntomas neurológicos
Temperatura rectal: la fiebre se definió como una temperatura rectal superior a 40,0˚C.
Estos experimentos se llevaron a cabo en estricto cumplimiento de la normativa nacional y europea, mediante un protocolo de ensayo in vivo aprobado por los Comités de Ética de la Universidad Complutense de Madrid y de la Comunidad de Madrid (PROEX 004/18 y 124/18). El protocolo incluye una descripción detallada de los esfuerzos para prevenir y evitar el sufrimiento innecesario de los animales, incluyendo los criterios de valoración humanitaria y las pautas eutanásicas. El punto final humanitario fue predefinido con un CS > 18, también se incluyeron animales con signos clínicos graves (puntuación 3) de fiebre, condición corporal, síntomas respiratorios y digestivos durante más de dos días consecutivos, siguiendo las directrices descritas por Cadenas-Fernández et al.19. Además, los animales que sufrían condiciones inaceptables, según el criterio del veterinario, sin alcanzar el punto final humanitario predefinido, también fueron eutanasiados. Todos los procedimientos fueron diseñados y llevados a cabo por veterinarios con formación específica (categorías de experimentación animal B, C y D) de acuerdo con la Directiva CE 86/609/CEE para la manipulación de animales y experimentos.
EXAMEN POST MORTEM
Los hallazgos macroscópicos se registraron siguiendo las pautas estandarizadas de lesiones macroscópicas para la infección por el VPPA en cerdos domésticos descritas previamente por Galindo-Cardiel et al., (2013)12, con ligeras modificaciones, incluyendo más tejidos evaluados y adaptados al jabalí (Tabla 1).
Se examinaron las alteraciones patológicas y su distribución en los diferentes tejidos y órganos:
Durante el examen post mortem, se tomaron muestras de sangre y de 18 tejidos sensibles, ocho de los cuales eran ganglios linfáticos (renal, mediastínico, retrofaríngeo, mesentérico, preescapular, gastrohepático, inguinal y mandibular), así como corazón, hígado, cerebro, bazo, tonsilas, pulmón, vejiga urinaria, riñón, médula ósea e intestino.
Estas muestras de tejido fueron analizadas mediante PCR en tiempo real (qPCR) para la detección del genoma viral según el protocolo descrito por King et al.14.
RESULTADOS
EVALUACIÓN CLÍNICA
Una dosis de 10 HAD50 de la cepa Arm07 fue suficiente para inducir el desarrollo de un cuadro clínico compatible con la PPA con un resultado letal en los seis animales inoculados por vía intramuscular (IM), así como para los once jabalíes puestos en contacto con los sujetos inoculados, manifestando una evolución clínica similar y el mismo grado de letalidad.
EVOLUCIÓN CLÍNICA
JABALÍES INOCULADOS CON EL VPPA VÍA IM
Los seis jabalíes inoculados vía IM empezaron a mostrar los primeros signos clínicos a los 3-6 dpi, con un aumento de la temperatura corporal (40,5 ± 0,5°C; 4/6 animales; 3-10 dpi) y una reducción de la vitalidad (4-10 dpi). Estos síntomas fueron seguidos por un eritema localizado o generalizado (6/6; 4-7 dpi), y ligera dificultad para caminar (6/6; 4-5 dpi).
JABALÍES PUESTOS EN CONTACTO CON SUJETOS INFECTADOS
Los once jabalíes puestos en contacto con los sujetos inoculados empezaron a mostrar los primeros signos clínicos entre los 9 y los 11 dpi, ligeramente más tarde en comparación con los animales inoculados por vía IM (prueba U de Mann-Whitney, p < 0,01), como era de esperar, debido al periodo de incubación.
La presentación clínica en los 11 animales en contacto también comenzó con síntomas inespecíficos, caracterizados por un aumento de la temperatura corporal (40,8 ± 0,7 C; 10-14 dpi) y una reducción de la vitalidad (10-12 dpi).
Se observaron otros signos clínicos, como eritema generalizado (5/11; 10-12 dpi), dificultad para caminar (7/11; 12-13 dpi), ligera secreción ocular (9/11; 10-12 dpi) y síntomas digestivos, como heces con gran cantidad de moco y vómitos esporádicos (4/11; 10-14 dpi).
EVALUACIÓN POST MORTEM
En todos los animales de ambos grupos de estudio, la necropsia reveló hallazgos macroscópicos consistentes con una infección aguda por el VPPA.
EXAMEN EXTERNO
El examen externo reveló un grado variable de congestión de la mucosa ocular con hemorragias, párpados hinchados (edema) y congestivos (Imagen 1).
Las lesiones cutáneas se caracterizaban por marcadas áreas eritematosas, más visibles en las zonas desprovistas de pelo, como la pared abdominal y las regiones inguinales o axilares (Imagen 2). Algunos jabalíes mostraban hemorragias multifocales o coalescentes en la piel y, ocasionalmente, zonas necróticas.
INSPECCIÓN DE ÓRGANOS INTERNOS
Los animales presentaban una acumulación moderada-grave de líquido amarillento-rojizo en la cavidad abdominal (ascitis), el tórax (hidrotórax) (Imagen 3) y el pericardio (hidropericardio).
PULMONES
A nivel macroscópico, los pulmones (principalmente los lóbulos caudales) se mostraban prominentes debido a la ausencia de colapso del parénquima pulmonar (Imagen 3).
La mayoría de los jabalíes (11/17) presentaban una dilatación de los tabiques interlobulares debido a un edema intersticial, así como la presencia de algunas petequias y pequeños focos de congestión lobular (Puntuación 1).
Las superficies pulmonares mostraban un aspecto “moteado” con múltiples petequias y equimosis, muchas de las cuales se habían unido para causar una extensa hemorragia.
Estos animales (4/17) mostraban múltiples áreas lobulares consolidadas caracterizadas por zonas ligeramente deprimidas con una distribución no homogénea compatible con una neumonía broncointersticial (Puntuación 2) asociada a adherencias pleurales o pleuritis fibrinosa.
Puntualmente, se observó consolidación lobular generalizada en dos animales con aproximadamente el 90% del parénquima pulmonar afectado, mostrando un aspecto firme y rojo oscuro (Puntuación 3) debido a una intensa congestión y hemorragia.
CORAZÓN
La válvula mitral estaba ligeramente engrosada, edematosa y tenía un aspecto blanquecino en todos los animales de ambos grupos del estudio (válvula edematosa) (Imagen 4) y se observaron petequias y equimosis multifocales en el epicardio y miocardio, así como en el endocardio valvular y parietal.
ÓRGANOS LINFOIDES
Varios tejidos linfoides, como las tonsilas, el bazo y los ganglios linfáticos, mostraban cambios intensos en la mayoría de los animales.
TONSILAS
La mucosa tonsilar (Imagen 5) mostraba una decoloración rojiza difusa debida a una congestión de leve a moderada.
En uno de los jabalíes, la mucosa tonsilar presentaba necrosis ulcerosa bilateral y depósito de material purulento amarillento (tonsilitis necrotizante y supurativa bilateral).
BAZO
El bazo tenía un color rojo oscuro y rezumaba abundante sangre de la superficie del corte (congestión), encontrándose notablemente aumentado de tamaño, con un rango de peso relativo de 0,11-0,20 peso corporal (valor normal de esplenomegalia 0,13 ± 0,1 peso corporal15).
Se observó linfadenomegalia en todos los animales. La mayoría de los linfonódulos (mandibulares, retrofaríngeos, traqueales, mediastínicos, gastrohepáticos, renales, mesentéricos, inguinales, esplénicos) mostraban un mayor tamaño y eran de color rojo oscuro intenso y brillante, compatible con una linfadenopatía hemorrágica (Imagen 6).
SISTEMA DIGESTIVO
Se observó un engrosamiento moderado de la mucosa del tracto digestivo. Estas zonas engrosadas mostraban pliegues edematosos prominentes, abundante moco amarillento y múltiples focos puntiformes de pequeño tamaño (petequias) a lo largo de la capa mucosa.
ESTÓMAGO
La mucosa gástrica evidenciaba erosiones multifocales (lesiones superficiales), con tejido normal alternando con pequeñas y profundas úlceras subagudas (Imagen 7).
INTESTINO
El íleon, el colon y el recto mostraban numerosas hemorragias (Imagen 8) asociadas a la hiperplasia del tejido linfoide asociado al intestino (GALT, por sus siglas en inglés, Gut-associated lymphoid tissue).
PÁNCREAS
Nueve de los 17 animales presentaban áreas necróticas en los bordes del páncreas (Imagen 9, flecha) y siete tenían petequias multifocales en la superficie.
HÍGADO
El hígado se encontraba aumentado de tamaño en todos los animales (hepatomegalia) (Imagen 10). Además, el parénquima hepático presentaba un color rojizo (congestión) con focos pálidos dispersos, lo que sugiere una necrosis hepática multifocal.
SISTEMA URINARIO
RIÑONES
Los riñones presentaban una congestión moderada tras la incisión, observándose petequias multifocales de hasta 1-2 mm en la corteza renal, así como en el parénquima cortical y medular (Imagen 11).
Por su parte, la pelvis renal mostraba un edema severo, que en algunos animales estaba asociado a hemorragia y grasa perirrenal edematosa (10/17).
VEJIGA URINARIA
La mucosa de la vejiga urinaria presentaba diferentes patrones de distribución de las hemorragias. La mayoría de los animales (11/17) presentaban petequias en la mucosa vesical de grado variable (Imagen 12).
Seis animales presentaban también un engrosamiento con pliegues irregulares y prominentes en la mucosa vesical debido a hemorragias intramurales. En estos casos intensos, la orina contenía numerosos coágulos de sangre.
CEREBRO
Los vasos sanguíneos submeníngeos del cerebro estaban notablemente congestionados (congestión vascular grave) y provocaban numerosas hemorragias superficiales y parenquimatosas (Imagen 13).
DISCUSIÓN
En este estudio se llevó a cabo una infección experimental con una dosis baja de un aislado altamente virulento del VPPA, Arm07, en jabalíes. Se estudiaron dos vías de infección diferentes, la inoculación IM y el contagio por contacto para poder evaluar la progresión clínica de la enfermedad y detallar los principales hallazgos patológicos macroscópicos en los jabalíes.
Se observó linfadenomegalia y esplenomegaliala mayoría de jabalíes. Estos hallazgos son coherentes con los principales hallazgos macroscópicos encontrados en cerdos domésticos4,5.
Los linfonódulos hipertróficos y hemorrágicos parecen ser una característica de la PPA, tanto en cerdos domésticos como en jabalíes16,17. Esta condición puede ser útil para caracterizar la PPA en jabalíes en libertad, junto con hallazgos patológicos macroscópicos menos frecuentes, pero más específicos, como hemorragias extensas en la mucosa vesical y focos necróticos en el páncreas, ya que estos últimos hallazgos no se habían caracterizado antes en cerdos domésticos6,17.
LA LINFADENOMEGALIA HEMORRÁGICA JUNTO CON HEMORRAGIAS EN LA MUCOSA VESICAL Y FOCOS NECRÓTICOS EN EL PÁNCREAS PUEDEN SER SUGESTIVOS DE PPA EN JABALÍES EN LIBERTAD
De acuerdo con la descripción de la evolución clínica en cerdos5, se observó que el mayor porcentaje de mortalidad en jabalíes ocurría durante la fase subaguda de la enfermedad (15 días posteriores a la infección con el genotipo II altamente virulento del VPPA). Sin embargo, las lesiones macroscópicas corresponden al curso agudo de la infección en cerdos domésticos, según Sánchez-Vizcaíno et al.5.
Muchos animales mostraron lesiones más características de la forma aguda de la infección descrita en cerdos domésticos, como eritema cutáneo, esplenomegalia severa, linfadenopatía hemorrágica; y petequias en los riñones, y corazón (endocardio)5. Además, se apreciaron cambios vasculares (hemorragias, edema y congestión) característicos de la fase subaguda en cerdos domésticos:
Agrandamiento severo del bazo debido a la congestión
Efusión en las cavidades corporales (hidropericardio y ascitis de leves a moderados, e hidrotórax moderado a severo)
Múltiples hemorragias(incluyendo petequias y equimosis) en el pulmón, corazón (endocardio), cerebro, riñones y vejiga urinaria5.
En general, el conocimiento detallado de las lesiones asociados a la cepa altamente virulenta del virus de la Peste Porcina Africana (Arm07) en jabalíes pueden contribuir a la detección temprana de la infección en este hospedador en el campo.
Este estudio confirma que el bazo y el hígado son los tejidos de elección a la hora de tomar muestras para la vigilancia pasiva y activa en poblaciones de jabalíes y para el diagnóstico de laboratorio basado en la detección del genoma viral.
La médula ósea podría ser un buen tejido para la toma de muestras, ya que también ha mostrado buenos resultados con bajos umbrales de detección (CT) por PCR, y tiene un valor adicional por su gran interés en el campo, ya que este tejido podría ser un lugar donde el genoma viral se conserve mejor.
Este estudio proporciona información más detallada sobre la infección por el VPPA en jabalíes con cepas virulentas que están circulando en la actualidad. Como concluye una reciente revisión, existen extensos estudios sobre los aislados del genotipo I del VPPA procedentes de la anterior propagación de este virus en los años 1950-196018.
Sin embargo, sigue habiendo carencias en cuanto a la patología asociada a cepas del genotipo II del VPPA procedentes de los escenarios epidémicos actuales, y mucho menos en jabalíes18, a pesar de su importante papel en la epidemiología de la enfermedad.
ESTE ESTUDIO PROPORCIONA DIRECTRICES AMPLIAS, DETALLADAS Y ESPECÍFICAS PARA LA EVALUACIÓN DE LOS HALLAZGOS MACROSCÓPICOS DE LA INFECCIÓN POR VPPA EN JABALÍES
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Grupo inoculado intramuscular: 
Grupo en contacto: 
