Suas infecções agudas ou subagudas são caracterizadas por febre alta e sangramento sistêmico como principais características clínicas para que a mortalidade possa chegar a 100% (Arias et al., 2018; S´ anchez-Cordon ´ et al., 2018).
A peste suína africana (PSA) é uma doença infecciosa grave que acomete suínos domésticos e javalis, causada pelo vírus da peste suína africana (VPSA). A Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) a lista como uma das doenças animais legalmente relatadas. Suínos domésticos de todas as raças e idades são suscetíveis ao VPSA. Clique aqui, para ler o artigo completo!
A peste suína africana (PSA) é uma doença infecciosa grave que acomete suínos domésticos e javalis, causada pelo vírus da peste suína africana (VPSA). A Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) a lista como uma das doenças animais legalmente relatadas. Suínos domésticos de todas as raças e idades são suscetíveis ao VPSA.
Suas infecções agudas ou subagudas são caracterizadas por febre alta e sangramento sistêmico como principais características clínicas para que a mortalidade possa chegar a 100% (Arias et al., 2018; S´ anchez-Cordon ´ et al., 2018).
A maioria dos isolados do VPSA contém a família de genes MGF100, incluindo pelo menos 4 genes diferentes:
Embora as funções desses genes MGF100 sejam bastante desconhecidas, I7L e I8L foram considerados genes não essenciais.
A deleção do gene I8L não alterou a replicação do vírus e a virulência em suínos.
Neste relatório, após a deleção do gene MGF100-1R, a replicação e as propriedades patogênicas do vírus mutante foram avaliadas in vitro e in vivo, respectivamente.
Material e métodos |
Leitões com cerca de 15-20 kg foram adquiridos em Shanghai com alto padrão de biossegurança e higiene. Vírus suínos comuns foram testados por métodos de PCR ou qPCR. VPSA △ MGF100-1R foi avaliado quanto ao seu fenótipo de virulência em relação ao vírus VPSA GZ201801 parental virulento. Grupos de leitões (n = 3) foram desafiados com vírus VPSA △ MGF100-1R ou o vírus de tipo selvagem intramuscularmente (IM) a uma dose de 104 TCID50. Os leitões inoculados com VPSA foram monitorados quanto à temperatura retal e outros sintomas clínicos foram registrados de acordo com o sistema de pontuação clínica, conforme descrito anteriormente (King et al., 2011). Amostras clínicas de soro, sangue total anticoagulado com heparina, zaragatoas orais, zaragatoas nasais e zaragatoas anais foram recolhidas 0-7, 9, 11, 15, 21 e 28 dias após a inoculação (dpi) para detecção do vírus.
Após avaliação clínica, os leitões foram eutanaziados por injeção de pentobarbital sódico e, em seguida, submetidos a exame de necropsia 30 dpi. Órgãos e tecidos, incluindo amígdala, fígado, baço, rim, coração, pulmão, fígado, estômago, duodeno, jejuno, íleo, ceco, cólon, reto, pâncreas, baço, rim, timo, bexiga, músculo esquelético, cérebro e linfonodos dos leitões eutanaziados ou sobreviventes que foram sacrificados no final do período de observação foram pontuados usando o sistema de pontuação bruto conforme descrito anteriormente (Galindo-Cardiel et al., 2013), e 100 mg das amostras indicadas foram homogeneizadas por Tissuelyser -FEII (Shanghai Jingxin Co. Ltd, Shanghai, China) em 800 μl de PBS suplementado com Pen-strep a 1% para a detecção de título de vírus pelo ensaio TCID50.
Resultados |
O VPSA tem pelo menos 4 genes diferentes da família MGF100, incluindo MGF100-1R, MGF100-1L, I7L e I8L.
O gene MGF100-1R codifica 125 resíduos de aminoácidos e está posicionado na fita positiva nas posições entre 11.094 nt e 11.468 nt do genoma do vírus ASFV GZ201801 . O gene MGF100-1R é altamente conservado em diferentes isolados do VPSA.
Por análise de RNA-seq, MGF100-1R mostrou um alto nível de transcrição dentro de 3 hpi e manteve um alto nível de transcrição de 6 a 18 hpi.
O mutante de deleção ASFV △ MGF100-1R foi obtido com sucesso por recombinação homóloga por meio de co-transfecção com o vetor pUC △ 1R e, em seguida, infecção com vírus de tipo selvagem GZ201801. O sequenciamento de próxima geração mostrou que o CDS MGF100-1R foi substituído por um gene repórter EGFP sob o controle do promotor do gene tardio p72 ASFV. O mutante de deleção foi purificado até a homogeneidade por rodadas sucessivas de purificação de placa e ensaio de diluição limitante. Finalmente, as células BMDM estavam quase 100% infectadas com o mutante de deleção purificado. Para garantir a ausência do vírus parental GZ201801 e a deleção desejada em cada vírus recombinante, os DNAs virais foram extraídos e identificados por PCR. Nenhum amplicon foi gerado com os primers específicos direcionados à sequência MGF100-1R CDS, indicando a falta de contaminação do estoque de vírus ASFV △ MGF100-1R com o vírus parental GZ201801.
É possível que a função do gene MGF100-1R possa ser compensada por outros genes VPSA. Isso prova que o gene MGF100-1R é um gene não essencial sem afetar a replicação do VPSA.
Para avaliar o efeito de MGF100-1R na expressão de citocinas pró-inflamatórias, os níveis de mRNA de IL-6, TNF-α, IFN-α, IFN-β e IFN-γ induzidos por VPSA GZ201801 ou ASFV △ MGF100-1R foram detectados por qPCR em pontos de tempo indicados. Os resultados mostraram que os níveis de mRNA de IL-6, TNF-α, IFN-α, IFN-β e IFN-γ em células BMDM infectadas com VPSA △ MGF100-1R foram significativamente menores do que os de GZ201801 infectados. Além disso, a análise de qPCR indicou que a superexpressão de pHA-1R em células HeLa ativou significativamente a expressão de IL-6, TNF-α, IFN-α, IFN-β e IFN-γ (Fig. 2D).
Estes resultados sugeriram que o VPSA MGF100-1R regula positivamente as citocinas celulares durante a infecção por VPSA.
Conclusão |
Consistente com isso, a expressão transitória da proteína MGF100-1R ativou significativamente o nível de transcrição de citocinas pró-inflamatórias nas células HeLa.
MGF100-1R pode ser um gene regulador de citocinas celulares no processo de infecção por VPSA.
O genoma do vírus da peste suína africana codifica cinco famílias MGF, e as regiões gênicas são altamente variáveis. A família MGF100 consiste em 6 parálogos altamente diversos entre os genomas. Curiosamente, o genoma da cepa chinesa GZ2018 de ASFV contém apenas 4 genes diferentes da família MGF100 (MGF100-1R, MGF100-1 L, I7L e I8L), faltando os genes MGF100-2L e MGF100-3L.
É interessante testar as funções dos outros genes da família MGF100 no futuro.
Inscreva-se agora para a revista técnica de suinocultura
AUTORES
Uso de Desinfetantes na Suinocultura
Andrea Karoline Mascitti Daniela Pinheiro Taís Regina Michaelsen Cê Tamara FloresVacinas autógenas na suinocultura – Parte I
Ana Paula Bastos Luizinho Caron Vanessa HaachAmbiência no inverno em granjas de suínos
Cleandro Pazinato Dias Fabricio Murilo Beker Jade PellenzFunção ovariana: Estabelecendo a vida reprodutiva da fêmea suína – Parte 1
Dayanne Kelly Oliveira Pires Fernanda Radicchi Campos Lobato de Almeida Isadora Maria Sátiro de Oliveira João Vitor Lopes Ferreira José Andrés Nivia Riveros Luisa Ladeia Ledo Stephanny Rodrigues RainhaMade in Brazil: a carne suína avançando no mundo
Luís RuaVacinação contra a Peste Suína Clássica no nordeste
Bruno de Moraes Charli Ludtke Nina M de OliveiraExplorando alternativas à ractopamina na nutrição de suínos: aditivos em foco
Beatriz Ribeiro Felipe César Augusto Pospissil Garbossa Laya Kannan Silva AlvesPesando o sucesso: O impacto do desempenho durante a fase creche sobre o peso ao abate de suínos
César Augusto Pospissil Garbossa Fabrício Faleiros de Castro Gustavo Gattás Maíra Resende Rhuan Filipe Chaves Vinícius de Souza CantarelliMicotoxinas em suínos – Deoxinivalenol (DON)
Gefferson Almeida da Silva José Paulo Hiroji SatoBem-estar animal: uma necessidade
Clarice Speridião Silva NetaDo estigma ao estrelato: A ascensão da carne suína no coração do consumidor
Lívia Machado