Suas infecções agudas ou subagudas são caracterizadas por febre alta e sangramento sistêmico como principais características clínicas para que a mortalidade possa chegar a 100% (Arias et al., 2018; S´ anchez-Cordon ´ et al., 2018).
A peste suína africana (PSA) é uma doença infecciosa grave que acomete suínos domésticos e javalis, causada pelo vírus da peste suína africana (VPSA). A Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) a lista como uma das doenças animais legalmente relatadas. Suínos domésticos de todas as raças e idades são suscetíveis ao VPSA. Clique aqui, para ler o artigo completo!
A peste suína africana (PSA) é uma doença infecciosa grave que acomete suínos domésticos e javalis, causada pelo vírus da peste suína africana (VPSA). A Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) a lista como uma das doenças animais legalmente relatadas. Suínos domésticos de todas as raças e idades são suscetíveis ao VPSA.
Suas infecções agudas ou subagudas são caracterizadas por febre alta e sangramento sistêmico como principais características clínicas para que a mortalidade possa chegar a 100% (Arias et al., 2018; S´ anchez-Cordon ´ et al., 2018).
A maioria dos isolados do VPSA contém a família de genes MGF100, incluindo pelo menos 4 genes diferentes:
Embora as funções desses genes MGF100 sejam bastante desconhecidas, I7L e I8L foram considerados genes não essenciais.
A deleção do gene I8L não alterou a replicação do vírus e a virulência em suínos.
Neste relatório, após a deleção do gene MGF100-1R, a replicação e as propriedades patogênicas do vírus mutante foram avaliadas in vitro e in vivo, respectivamente.
Material e métodos |
Leitões com cerca de 15-20 kg foram adquiridos em Shanghai com alto padrão de biossegurança e higiene. Vírus suínos comuns foram testados por métodos de PCR ou qPCR. VPSA △ MGF100-1R foi avaliado quanto ao seu fenótipo de virulência em relação ao vírus VPSA GZ201801 parental virulento. Grupos de leitões (n = 3) foram desafiados com vírus VPSA △ MGF100-1R ou o vírus de tipo selvagem intramuscularmente (IM) a uma dose de 104 TCID50. Os leitões inoculados com VPSA foram monitorados quanto à temperatura retal e outros sintomas clínicos foram registrados de acordo com o sistema de pontuação clínica, conforme descrito anteriormente (King et al., 2011). Amostras clínicas de soro, sangue total anticoagulado com heparina, zaragatoas orais, zaragatoas nasais e zaragatoas anais foram recolhidas 0-7, 9, 11, 15, 21 e 28 dias após a inoculação (dpi) para detecção do vírus.
Após avaliação clínica, os leitões foram eutanaziados por injeção de pentobarbital sódico e, em seguida, submetidos a exame de necropsia 30 dpi. Órgãos e tecidos, incluindo amígdala, fígado, baço, rim, coração, pulmão, fígado, estômago, duodeno, jejuno, íleo, ceco, cólon, reto, pâncreas, baço, rim, timo, bexiga, músculo esquelético, cérebro e linfonodos dos leitões eutanaziados ou sobreviventes que foram sacrificados no final do período de observação foram pontuados usando o sistema de pontuação bruto conforme descrito anteriormente (Galindo-Cardiel et al., 2013), e 100 mg das amostras indicadas foram homogeneizadas por Tissuelyser -FEII (Shanghai Jingxin Co. Ltd, Shanghai, China) em 800 μl de PBS suplementado com Pen-strep a 1% para a detecção de título de vírus pelo ensaio TCID50.
Resultados |
O VPSA tem pelo menos 4 genes diferentes da família MGF100, incluindo MGF100-1R, MGF100-1L, I7L e I8L.
O gene MGF100-1R codifica 125 resíduos de aminoácidos e está posicionado na fita positiva nas posições entre 11.094 nt e 11.468 nt do genoma do vírus ASFV GZ201801 . O gene MGF100-1R é altamente conservado em diferentes isolados do VPSA.
Por análise de RNA-seq, MGF100-1R mostrou um alto nível de transcrição dentro de 3 hpi e manteve um alto nível de transcrição de 6 a 18 hpi.
O mutante de deleção ASFV △ MGF100-1R foi obtido com sucesso por recombinação homóloga por meio de co-transfecção com o vetor pUC △ 1R e, em seguida, infecção com vírus de tipo selvagem GZ201801. O sequenciamento de próxima geração mostrou que o CDS MGF100-1R foi substituído por um gene repórter EGFP sob o controle do promotor do gene tardio p72 ASFV. O mutante de deleção foi purificado até a homogeneidade por rodadas sucessivas de purificação de placa e ensaio de diluição limitante. Finalmente, as células BMDM estavam quase 100% infectadas com o mutante de deleção purificado. Para garantir a ausência do vírus parental GZ201801 e a deleção desejada em cada vírus recombinante, os DNAs virais foram extraídos e identificados por PCR. Nenhum amplicon foi gerado com os primers específicos direcionados à sequência MGF100-1R CDS, indicando a falta de contaminação do estoque de vírus ASFV △ MGF100-1R com o vírus parental GZ201801.
É possível que a função do gene MGF100-1R possa ser compensada por outros genes VPSA. Isso prova que o gene MGF100-1R é um gene não essencial sem afetar a replicação do VPSA.
Para avaliar o efeito de MGF100-1R na expressão de citocinas pró-inflamatórias, os níveis de mRNA de IL-6, TNF-α, IFN-α, IFN-β e IFN-γ induzidos por VPSA GZ201801 ou ASFV △ MGF100-1R foram detectados por qPCR em pontos de tempo indicados. Os resultados mostraram que os níveis de mRNA de IL-6, TNF-α, IFN-α, IFN-β e IFN-γ em células BMDM infectadas com VPSA △ MGF100-1R foram significativamente menores do que os de GZ201801 infectados. Além disso, a análise de qPCR indicou que a superexpressão de pHA-1R em células HeLa ativou significativamente a expressão de IL-6, TNF-α, IFN-α, IFN-β e IFN-γ (Fig. 2D).
Estes resultados sugeriram que o VPSA MGF100-1R regula positivamente as citocinas celulares durante a infecção por VPSA.
Conclusão |
Consistente com isso, a expressão transitória da proteína MGF100-1R ativou significativamente o nível de transcrição de citocinas pró-inflamatórias nas células HeLa.
MGF100-1R pode ser um gene regulador de citocinas celulares no processo de infecção por VPSA.
O genoma do vírus da peste suína africana codifica cinco famílias MGF, e as regiões gênicas são altamente variáveis. A família MGF100 consiste em 6 parálogos altamente diversos entre os genomas. Curiosamente, o genoma da cepa chinesa GZ2018 de ASFV contém apenas 4 genes diferentes da família MGF100 (MGF100-1R, MGF100-1 L, I7L e I8L), faltando os genes MGF100-2L e MGF100-3L.
É interessante testar as funções dos outros genes da família MGF100 no futuro.
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