Caracterización in vitro del virus de la parainfluenza porcina tipo 1
El virus de la parainfluenza porcina tipo 1 (PPIV-1) es un miembro del género Respirovirus en la familia Paramyxoviridae. El PPIV-1 se detectó inicialmente en 2013 en cerdos de matadero en Hong Kong, China, aunque se desconoce su papel en las enfermedades respiratorias sin aislamientos de virus para inoculación experimental en cerdos.
El virus de la parainfluenza porcina tipo 1 (PPIV-1) es un miembro del género Respirovirus en la familia Paramyxoviridae. El PPIV-1 se detectó inicialmente en 2013 en cerdos de matadero en Hong Kong, China, aunque se desconoce su papel en las enfermedades respiratorias sin aislamientos de virus para inoculación experimental en cerdos.
Objetivos
Determinar la frecuencia relativa de detección de PPIV-1 en muestras de diagnóstico recolectadas de cerdos en los Estados Unidos, describir el aislamiento de cultivo celular de PPIV-1 y caracterizar aislados de cultivo celular de PPIV-1 in vitro.
Método y materiales
Entre las 842 muestras porcinas enviadas al Laboratorio de Diagnóstico Veterinario de la Universidad Estatal de Iowa, el 43,3% fueron positivas para PPIV-1 mediante una PCR con transcriptasa inversa en tiempo real, lo que sugiere que la PPIV-1 puede ser común en los cerdos.
Se aislaron con éxito dos cepas de PPIV-1 en una línea celular LLC-MK2 de un hisopo nasal positivo para PPIV-1 RT-qPCR (USA / MN25890NS) y pulmón (USA / IA84915LG). El efecto citopático de PPIV-1 se demostró en cultivo de tejidos y las partículas virales envueltas se observaron mediante microscopía electrónica.
Resultados
El genoma completo, las secuencias de genes F y HN de ambos aislamientos comparten 98,2%, 98,5% y 98,2% de homología de nucleótidos, respectivamente, y el análisis filogenético indicó que están estrechamente relacionados con otras cepas de PPIV-1 detectadas en cerdos de Estados Unidos.
Se generaron anticuerpos monoclonales específicos de PPIV-1 de virus completo para la detección de PPIV-1 en células LLC-MK2 infectadas mediante ensayos de inmunofluorescencia indirecta e inmunocitoquímica.
Los aislados de virus y los anticuerpos monoclonales obtenidos en el presente estudio pueden usarse para investigar la patogénesis de PPIV-1 y desarrollar nuevas pruebas de diagnóstico.
Conclusiones
El virus de la parainfluenza porcina tipo 1 se ha detectado mediante PCR en cerdos en los Estados Unidos, tanto en el pulmón, el hisopo nasal y el líquido oral los cuales son tipos de muestras adecuados para detectar PPIV-1 mediante esta técnica.
El virus de la parainfluenza porcina tipo 1 se ha aislado en células LLC-MK2, observando un efecto citopático debido a PPIV-1 en células LLC-MK2 puede incluir sincitios y células multinucleadas. Los genes de fusión y hemaglutinina-neuraminidasa son apropiados para evaluar la epidemiología de PPIV-1.
