Diagnóstico molecular del PRRS: de la PCR a tiempo real a la secuenciación masiva
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| El Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRS) es una de las enfermedades más importantes en la industria porcina a nivel mundial ya que ocasiona elevadas pérdidas económicas1,2. Este impacto económico está asociado principalmente al aumento de la mortalidad en lechones, la necesidad del uso de vacunas y la implementación de medidas de bioseguridad3. La enfermedad afecta a cerdas reproductoras, lechones y cerdos jóvenes en crecimiento.
En cerdas se observan problemas reproductivos como abortos, repeticiones, mayor incidencia de mortinatos, fetos momificados y lechones nacidos débiles. Además, puede ocasionar disminución en el crecimiento y aumento de la tasa de mortalidad en lechones por problemas respiratorios y susceptibilidad a otros agentes patógenos4. |
EL VIRUS PRRS
Entre ambos genotipos existen grandes diferencias a nivel de genoma, ya que solo comparten entre un 50-70% de identidad nucleotídica.
| Dentro de un mismo genotipo existe gran variabilidad entre cepas, pudiendo llegar a diferir en hasta el 15% en el genoma6,7. El tamaño del genoma del PRRSV es de unos 15.000 pares de bases, correspondiendo tres cuartas partes al ORF1, que codifica para proteínas no estructurales. El resto del genoma comprende el resto de ORF (ORF2a, ORF2b, ORF3, ORF4, ORF5, ORF6 y ORF7) que codifican para las proteínas estructurales del virus (Figura 1)8. |
LA GRAN VARIABILIDAD GENÉTICA DEL PRRSV ES FRUTO DE SU ELEVADA TASA DE MUTACIÓN Y DE LOS FENÓMENOS DE RECOMBINACIÓN
En un animal infectado, lo habitual es que se encuentre un conjunto de cuasiespecies virales sobre las que actúa la presión selectiva derivada de la inmunidad del hospedador9,10. Todo ello ha conducido al extenso abanico de cepas circulantes PRRS en todo el mundo11.
DIAGNÓSTICO DE PRRS
El grave impacto productivo derivado del PRRS ha hecho que, desde su descubrimiento a finales de los años ochenta, el virus siga siendo objeto de numerosas investigaciones con el objetivo de entender los mecanismos que intervienen en su patogénesis y epidemiología, así como desarrollar estrategias para el control efectivo de la enfermedad.
| Existen diferentes herramientas de diagnóstico disponibles actualmente. A continuación, repasaremos las principales técnicas empleadas actualmente, incidiendo en su utilidad práctica. |
TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS Y CULTIVO VIRAL
El uso de técnicas serológicas es común para la detección de anticuerpos frente al virus, aunque no permiten diferenciar anticuerpos de infecciones activas de los producidos como respuesta a la vacunación.
Por otro lado, a pesar de la complejidad y el largo tiempo de análisis, el aislamiento y cultivo viral también se han empleado como método de diagnóstico. Además, técnicas como la inmunohistoquímica y la inmunofluorescencia permiten detectar el antígeno viral pero su sensibilidad es limitada14.
TÉCNICAS MOLECULARES
Las técnicas moleculares basadas en la detección del genoma viral, como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), confieren gran sensibilidad y especificidad15.
