Diagnóstico laboratorial de la leptospirosis porcina

Métodos directos

   Cultivo y aislamiento  

El único método que nos permite determinar la serovariedad de Leptospira es el cultivo y aislamiento, pero es difícil, caro y tedioso.

Condiciones de envío de la muestra

Las leptospiras son muy sensibles al pH y a las condiciones ambientales, por lo que las muestras deben enviarse en un medio de transporte con seroalbúmina y pH neutro, no siendo válidos los hisopos en medios de transporte convencionales.

El éxito depende de que:

• En la muestra no haya residuos antibióticos.
• La autolisis tisular no esté avanzada.
• Las muestras se hayan mantenido en refrigeración.
• Que no transcurran más de 24 horas entre su obtención y el cultivo.

En España no hay reportados aislamientos de esta serovariedad en ganado porcino, lo que unido a la dificultad para obtener crecimientos con suficiente concentración, hace poco probable que puedan elaborarse autovacunas frente a esta serovariedad.

  PCR  

Entre los métodos de diagnóstico directo de la leptospirosis más utilizados están las técnicas de PCR debido a las ventajas que ofrecen:

• Gran sensibilidad
• No requieren bacterias viables
• Rapidez

 LIMITACIONES DE LA PCR

Los principales problemas de estas técnicas son que, en muchos casos, no están validadas o la validación se ha realizado frente a la prueba serológica de microaglutinación (MAT), cuya sensibilidad en infecciones por serovariedades adaptadas es muy baja.

Otro problema es la posible presencia de inhibidores de la reacción, lo cual puede ser frecuente en las muestras de abortos debido a la autolisis fetal. Para evitar en parte este problema, es aconsejable enviar muestras del contenido de estómago de los fetos.

Interpretación de resultados de los métodos de diagnóstico directo

Un resultado positivo en sangre o en múltiples órganos internos diferentes de riñón y aparato genital, sirve para establecer un diagnóstico de leptospirosis.

La demostración de leptospiras únicamente en riñón, tracto genital, orina o semen solo es indicativo de un estado de portador. Sin embargo, si no se detectan leptospiras en orina no implica que el animal no sea portador, ya que puede ser que el resultado sea negativo porque no excrete una concentración suficiente de leptospiras en ese momento.

Un resultado positivo en fluidos u órganos de fetos abortados o lechones nacidos muertos indica una infección activa del feto y leptospirosis crónica de la cerda. Sin embargo, la demostración de leptospiras solo en la placenta no significa que se haya producido infección fetal.

MÉTODOS INDIRECTOS

  PRUEBA DE MICROAGLUTINACIÓN (MAT)  

La prueba más utilizada para el diagnóstico de leptospirosis es la prueba de microaglutinación (microscopic agglutination test o MAT).

La prueba consiste en mezclar diferentes diluciones del suero con una suspensión de leptospiras vivas y el título será la dilución más alta en la que se observen la mitad o más de las leptospiras aglutinadas.

ESPECIFICIDAD DE LA PRUEBA DE MICROAGLUTINACIÓN

En nuestro país deberían incluirse como mínimo cepas de las serovariedades Bratislava, Canicola, Icterohaemorrhagiae, Pomona y Castellonis.

 VALOR DIAGNÓSTICO DE LA PRUEBA DE MICROAGLUTINACIÓN

CASOS AGUDOS

Como prueba individual, tiene valor diagnóstico en los casos agudos.

 Ictericia

Hemoglobinuria

Convulsiones en animales menores de tres meses, que normalmente se recuperan

 ABORTOS & INFERTILIDAD

En casos de abortos y nacidos muertos o poco viables tiene valor diagnóstico si se detectan anticuerpos en suero fetal o en suero de lechones que no han tomado calostro.

En el caso de las serovariedades accidentales y la serovariedad Pomona, puede servir para hacer un diagnóstico presuntivo, ya que al momento del aborto se detectarán muchos animales que mantienen títulos por encima de 1/100.

En los casos de abortos e infertilidad por las serovariedades Bratislava y Muenchen, la serología puede ser de poca utilidad, ya que se ha descrito que hasta un tercio de los animales no tienen títulos de anticuerpos detectables en el momento del aborto.

Un resultado negativo o por debajo de 1/100 en la prueba MAT no excluye la posibilidad de que la leptospirosis sea la causa del fallo reproductivo.

 PORTADORES RENALES Y GENITALES

Por último, el MAT no es fiable para la detección de portadores renales (serovariedades Pomona Tarassovi, Bratislava y Muenchen) y/o genitales (serovariedades Bratislava y Muenchen).

Así, se han descrito casos de infecciones por la serovariedad Pomona en los que la leptospiruria dura años, por lo que en estos animales no detectaremos títulos significativos de anticuerpos, pero estarán eliminando leptospiras en la orina.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS DE LA PRUEBA DE MICROAGLUTINACIÓN

En general, la cepa frente a la que se obtengan los títulos más altos en la MAT se corresponderá con el serogrupo infectante. Sin embargo hay que considerar varios aspectos:

• La serovariedad implicada no tiene porqué ser la misma que la utilizada en la prueba.

Ej.: la serovariedad que se aconseja como representativa del serogrupo Pomona es la serovariedad Pomona. Si en el MAT se obtienen los títulos más altos frente a esta cepa, no diferencia si la serovariedad implicada es la serovariedad adaptada Pomona o la serovariedad accidental Mozdok, que son las dos que sabemos que circulan en nuestro país de este serogrupo.

• Hay reacciones cruzadas entre serogrupos y en algunas infecciones puede que se obtengan títulos muy similares frente a más de una de las cepas utilizadas en el MAT.

Ej.: en caso de infecciones por el serogrupo Pomona, hemos observado títulos en un mismo suero de 1/10.000 tanto frente a la serovariedad Pomona como a la serovariedad Bratislava o diferencias en el título frente a ambas serovariedades de solo una dilución.

  ELISA  

Finalmente, las pruebas ELISA son muy útiles por su sencillez en comparación con el MAT.